材料准备与个人防护
材料准备：需要准备25%浓度的戊二醛水溶液，并将其用PBS溶液稀释至2~3%的工作浓度。
个人防护：由于戊二醛具有一定的毒性，操作过程中应采取适当的保护措施，如戴上手套和防护眼镜，避免皮肤直接接触，一旦沾到皮肤上应立即用大量水冲洗。
固定过程
1. 样品预处理
– 将细菌样品置于适宜的容器中，例如微量离心管或专用的固定容器。
2. 添加固定液
– 向样品中添加足够量的2~3%戊二醛固定液，确保完全覆盖样品。
3. 固定条件
– 在室温下固定样品，并静置过夜以确保充分固定。
脱水与干燥
1. 乙醇脱水
– 固定后，需用乙醇对样品进行脱水处理，通常从低浓度逐渐到高浓度乙醇进行逐步脱水。
2. 空气干燥
– 脱水后，将样品置于空气中干燥一到两天，以去除残余的水分和乙醇。
后续处理
1. 喷金处理
– 对于用于扫描电镜观察的样品，需要进行喷金处理，以增加样品的导电性和观察效果。
2. 其他固定剂补充
– 对于含脂类较多的细菌样品，可考虑使用四氧化锇作为固定剂来增强固定效果，尤其是针对细胞膜等结构的清晰呈现。
注意事项
固定时间：虽然戊二醛可以长时间固定样品，但最好不要超过一周，以避免过度固定影响结构细节。
储存条件：市售的戊二醛应存放于4℃冰箱中遮光保存，以保证其稳定性和有效性。
相关问题与解答
问题1：如果固定时间过长会有什么影响？
解答：固定时间过长可能导致细菌样品过度硬化，从而在微观观察时损失一些结构细节，尤其是对于含有丰富细胞结构的细菌，过长时间的固定可能会使得其细胞内的某些成分发生变性，影响观察结果。
问题2：为什么需要用乙醇进行脱水处理？
解答：脱水处理是为了去除样品中的水分，因为水分会在后续的电镜观察中影响图像质量，可能形成冰晶或导致样品充电，乙醇可以有效地替换出样品中的水分，并通过空气干燥去除，为获得高质量的电镜图像打下基础。
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